DNA重組技術(shù)翻譯
重組DNA技術(shù)(recombinant DNA technique)又稱遺傳工程,在體外重新組合脫氧核糖核酸(DNA)分子,并使它們?cè)谶m當(dāng)?shù)募?xì)胞中增殖的遺傳操作。這種操作可把特定的基因組合到載體上,并使之在受體細(xì)胞中增殖和表達(dá)。因此它不受親緣關(guān)系限制,為遺傳育種和分子遺傳學(xué)研究開辟了嶄新的途徑。
重組DNA技術(shù)來源于兩個(gè)方面的基礎(chǔ)理論研究——限制性核酸內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)和基因載體(簡(jiǎn)稱載體)。限制酶的研究可以追溯到1952年美國(guó)分子遺傳學(xué)家S.E.盧里亞在大腸桿菌中所發(fā)現(xiàn)的一種所謂限制現(xiàn)象——從菌株甲的細(xì)菌所釋放的噬菌體能有效地感染同一菌株的細(xì)菌,可是不能有效地感染菌株乙;少數(shù)被感染的菌株乙的細(xì)菌所釋放的同一噬菌體能有效地感染菌株乙可是不能有效地感染菌株甲。
重組DNA技術(shù)中所用的載體主要是質(zhì)粒和溫和噬菌體(見轉(zhuǎn)導(dǎo))兩類,而在實(shí)際應(yīng)用中的載體幾乎都是經(jīng)過改造的質(zhì);驕睾褪删w。
重組DNA技術(shù)一般包括四步:
①產(chǎn)生DNA片段;
②DNA片段與載體DNA分子相連接;
③將重組DNA分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞;
④選出含有所需要的重組體DNA分子的宿主細(xì)胞。在具體工作中選擇哪條技術(shù)路線。主要取決于基因的來源、基因本身的性質(zhì)和該項(xiàng)遺傳工程的目的。
重組DNA片段的取得 主要的方法有:
①利用限制酶取得具有粘性末端或平整末端的DNA片段;
②用機(jī)械方法剪切取得具有平整末端的DNA片段,例如用超聲波斷裂雙鏈DNA分子;
③經(jīng)反向轉(zhuǎn)錄酶的作用從mRNA獲得與mRNA順序互補(bǔ)的DNA單鏈,然后再?gòu)?fù)制形成雙鏈DNA(cDNA)。
④用化學(xué)方法合成DNA片段。從蛋白質(zhì)肽鏈的氨基酸順序可以知道它的遺傳密碼。依照這密碼用化學(xué)方法可以人工合成基因。
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